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伯樂轉印槽使用方法步驟
點擊次數:3894 更新時間:2016-07-06
伯樂轉印槽使用方法步驟:
全程請戴手套操作,以免污染伯樂轉印槽!
1)電泳后SDS-PAGE 膠片浸在轉印緩沖液中,洗2~3 次,每次10min.
2)取出伯樂轉印槽,先小心放一攪拌子在底部,再倒一半轉印緩沖液。
3)取轉印紙切成約如膠片大小,先在方形培養皿中以少許甲醇浸濕數秒鐘,再置入伯樂轉印槽中的緩沖液10 min 后使用。 另取兩張濾紙,以及兩片方形海綿墊,都放在伯樂轉印槽的緩沖液中備用。
4)取出轉印夾打開平放,先墊一張方形海棉墊,鋪上一張濕濾紙,小心平鋪SDS-PAGE膠上去,然后小心迭上已潤濕的轉印紙,用涂菌玻璃棒趕出氣泡;轉印紙再滴上數滴緩沖液后,加蓋一層濾紙,及另一張海綿,也都不可陷入氣泡,即可把整個轉印三明治卡夾裝好。
膠迭到轉印紙時,一次成功,不要重作,否則蛋白質色帶可能會印上去,后產生重迭影像。
5)將轉印三明治置入已經放有一半轉印緩沖液的伯樂轉印槽中,注意有轉印紙的那一面向正極(紅色),膠片那面向負極(黑色)。
6)當三明治都放入伯樂轉印槽后,以轉印緩沖液蓋滿所有的三明治,小心動一動卡夾,除去附在卡夾內外的氣泡,蓋上蓋子,放到一攪拌器上,打開攪拌器開始攪拌,同時接好電源,裝置完成后放置10 min.
7)以300mA開始轉印,溫度會漸漸上升,轉印1.5 h左右 后中止轉印,取出轉印三明治,打開后依次取出轉印紙及膠。
具體轉印條件要根據蛋白的大小進行優化,注意低溫。
8)轉印后的膠片可以繼續進行染色,看有無蛋白質殘留。若電泳時加有藍色標準蛋白質marker(SeeBlue),則可在轉印紙上看到藍色的色帶,確定轉印成功,并可評估轉印效率。
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