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使用美國(guó)伯樂(lè)PCR儀進(jìn)行試驗(yàn)要注意哪些事情
點(diǎn)擊次數(shù):2898 更新時(shí)間:2021-11-05
 
  簡(jiǎn)單的說(shuō),美國(guó)伯樂(lè)PCR儀就是利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制。
 
  目前,常用的技術(shù),可以將一段基因復(fù)制為原來(lái)的一百億至一千億倍。根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn),可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類。
 
  美國(guó)伯樂(lè)PCR儀的實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng):
 
  盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽(yáng)性反應(yīng)的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真,在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意:
 
  1.戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,立即更換手套;
 
  2.使用一次性吸頭,嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
 
  3.避免反應(yīng)液飛濺,打開(kāi)反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況,開(kāi)蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
 
  4.操作多份樣品時(shí),制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應(yīng)的精確度;
 
  5.最后加入反應(yīng)模板,加入后蓋緊反應(yīng)管;
 
  6.操作時(shí)設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照,即可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性;
 
  7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器最容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染,最好使用可替換或高壓處理的加樣器。
 
  如沒(méi)有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過(guò)程中加樣器應(yīng)該專用,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區(qū);
 
  8.重復(fù)實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證結(jié)果,慎下結(jié)論。
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